輔助方案 TCA 沉淀測定標記摻入量

材料與儀器

被標記的細胞懸液（見基本方案或備擇方案 1～4）
0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN3 10%TCA 溶液 冷凍乙醇
連接真空管道的濾過裝置 2.5 cm 玻璃微纖維濾膜（Whatman GF／C）

步驟

1. 加 10～20 μl 被標記的細胞懸液到 0.1 ml 0.1％（m/V）BSA/0.02％（m/V）NaN3 中，置于冰上。

2. 加 1 ml 冷凍的 10％（m/V）TCA 溶液。劇烈振蕩混勻，在冰上孵育 30 min。

3. 在真空濾過裝置內(nèi)，濾過細胞懸液到 2.5 cm 玻璃微纖維濾膜上。

4. 用 5ml 冷凍 10％TCA 溶液洗膜 2 次，再用乙醇洗 2 次。空氣干燥 30 min。

5. 在玻璃微纖維濾膜上點同樣體積（見步驟 1，10～20 μl）的放射性標記的細胞懸液，在空氣中干燥。

6. 轉(zhuǎn)移濾膜到 20 ml 閃爍管里，加 5 ml 閃爍記數(shù)溶液，用閃爍記數(shù)儀測定放射活性。

7. 計算 TCA 沉淀標記（見步驟 4）與總放射活性的比值（見步驟 5）。

注意事項

１. TCA 有強烈腐蝕性。在制備和操作 TCA 溶液時注意保護眼睛并避免皮膚接觸。

2. 洗液應按照混合化學/放射性廢棄物處理。根據(jù)安全規(guī)程進行處理。

常見問題

同實驗其他方法