備擇方案 3 長期細(xì)胞標(biāo)記

材料與儀器

細(xì)胞懸液／貼壁細(xì)胞 [35S]標(biāo)記L-甲硫氨酸（>800 Ci／mmol)／[35S]標(biāo)記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物
PBS(冷凍) 37℃ 長期標(biāo)記培養(yǎng)基
75 cm2 組織培養(yǎng)瓶

步驟

1. 在預(yù)熱的 37℃ 長期標(biāo)記培養(yǎng)基中制備 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液（見基本方案步驟 1）。

2.1 對(duì)于懸浮細(xì)胞：用預(yù)熱的長期標(biāo)記培養(yǎng)基準(zhǔn)備并洗細(xì)胞一次（見基本方案步驟 2）。

在 25 ml 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液中重懸 0.5 ×107～2 ×107 細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到 75 cm2 組織培養(yǎng)瓶中。

2.2 對(duì)貼壁細(xì)胞： 75 cm2 組織培養(yǎng)瓶中生長 0.5 ×107 ～2 ×107 的貼壁細(xì)胞（80% ～90%融合），在 CO2 培養(yǎng)箱中。用預(yù)熱的長期標(biāo)記培養(yǎng)基洗細(xì)胞一次（見備擇方案 1 步驟 3）。每個(gè) 75 cm2 組織培養(yǎng)瓶中加入 25 ml 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液。

3. 擰緊蓋子以防 [35S] 標(biāo)記的化合物揮發(fā)。在 CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 16 h。

4. 洗細(xì)胞并測定摻入量（見基本方案步驟 5～7；或備擇方案 1 步驟 6～8）

注意事項(xiàng)

常見問題

同實(shí)驗(yàn)其他方法