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raw 264.7巨噬細(xì)胞表面蛋白酶的表達(dá)解析

發(fā)布時(shí)間： 2025-10-16　　點(diǎn)擊次數(shù)： 27次

　　提起巨噬細(xì)胞，人們常想到它“吃掉”病原體的場(chǎng)景。raw 264.7巨噬細(xì)胞更像一位多才多藝的指揮官：一邊吞噬，一邊把多種蛋白酶擺到細(xì)胞膜外，剪切、激活或降解周圍的蛋白質(zhì)，從而引導(dǎo)炎癥走向。要想知道這些“分子剪刀”何時(shí)出現(xiàn)、出現(xiàn)多少，就得先過(guò)三關(guān)：分離、標(biāo)記、定量。
　　一、分離
　　常用的來(lái)源是腹腔灌洗液：向大鼠腹腔注射預(yù)冷PBS，輕輕按摩后回抽，可獲得＞85%純度的巨噬細(xì)胞。若需組織原位巨噬細(xì)胞，則把肝或脂肪墊剪碎，用膠原酶Ⅳ消化30min，再通過(guò)CD11b+F4/80+磁珠或流式分選，就能拿到“三陽(yáng)性”群體。
　　二、標(biāo)記
　　膜蛋白酶多為跨膜或糖基錨定蛋白，如基質(zhì)金屬蛋白酶-14（MT1-MMP）、CD26、ADAM17等。用熒光抗體標(biāo)記時(shí)，需先在4℃下做Fc受體阻斷，避免非特異結(jié)合；隨后與抗體孵育45min，即可上機(jī)檢測(cè)。若目標(biāo)豐度低，可采用生物素-鏈霉親和素二次放大，信號(hào)可再增5-10倍。
　　三、定量
　　流式細(xì)胞術(shù)給出的僅是相對(duì)熒光強(qiáng)度。要換算成每個(gè)細(xì)胞的抗原數(shù)，可借助定量微球標(biāo)準(zhǔn)曲線：微球預(yù)先偶聯(lián)已知量的抗小鼠IgG，與樣本同行染色，通過(guò)熒光強(qiáng)度-分子數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可把MT1-MMP的“平均熒光2570”換算為“約1.8×10?分子/細(xì)胞”。如此，不同實(shí)驗(yàn)批次的數(shù)據(jù)就能橫向比較。
　　場(chǎng)景舉例：腹膜透析模型中MMP-12的時(shí)空表達(dá)
　　一項(xiàng)研究用高糖腹透液持續(xù)刺激大鼠，第7天即可檢出腹膜巨噬細(xì)胞表面MMP-12顯著上調(diào)；到第28天，其mRNA水平升高4.3倍，膜定位蛋白增加2.1倍，提示長(zhǎng)期刺激促使細(xì)胞把更多MMP-12送到膜外，參與腹膜膠原重塑。
　　從腹腔灌洗到流式定量，只需三步，就能把巨噬細(xì)胞“誰(shuí)、何時(shí)、多少”表達(dá)膜蛋白酶說(shuō)得清清楚楚。掌握這套流程，我們就能在膿毒癥、組織纖維化或腫瘤微環(huán)境中，追蹤免疫應(yīng)答的“剪刀手”們?nèi)绾渭舫鲅装Y的結(jié)局。

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