Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2小鼠 使用指南

Cre-ERT2小鼠是一類含有雌激素受體的配體結(jié)合區(qū)突變體（ERT）與cre重組酶的融合蛋白表達的小鼠。Cre-ERT2在無Tamoxifen誘導(dǎo)的情況下，在細胞質(zhì)內(nèi)處于無活性狀態(tài)；當(dāng)Tamoxifen誘導(dǎo)后，Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT（雌激素類似物）與ERT結(jié)合，可使Cre-ERT2進核發(fā)揮Cre重組酶活性。

Tamoxifen給藥建議如下：

3. 他莫昔芬的給藥方式

他莫昔芬可以通過腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應(yīng)用比較廣的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準，便于控制。

腹腔注射給藥流程：正確抓取小鼠，將小鼠的鼻子朝向地面，露出腹部；定位動物的中線并將腹部分成四個象限，特別是動物的右下象限，是腹腔注射的合適位置（右下象限缺少重要的解剖結(jié)構(gòu)）；多次腹腔注射時，應(yīng)交替注射部位。

注：Tamoxifen會影響胎兒發(fā)育和生產(chǎn)，孕鼠誘導(dǎo)的時間盡量選擇孕晚期，并同時注射孕酮來減少流產(chǎn)概率。

灌胃給藥的給藥劑量和頻率與腹腔注射相同，在正式實驗前，建議同學(xué)們先反復(fù)練習(xí)，熟練掌握灌胃給藥的技巧。

飲食/飲水給藥使用較少，主要是他莫昔芬水溶性差，小鼠的給藥劑量不好量化，且需要的誘導(dǎo)時間較長（一般需要幾周進行誘導(dǎo)），在誘導(dǎo)期間往往還伴隨著小鼠體重的下降（約10-15%）。

4. 注意事項

A. 他莫昔芬注射完成后不建議立刻開展實驗，一般來講，停藥后需要繼續(xù)飼養(yǎng)7天，再安排后續(xù)實驗。

B. 對照組小鼠需要同步進行不含他莫昔芬的玉米油溶液給藥。

C. 未處理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分籠飼養(yǎng)，小鼠舐舔到他莫昔芬懸液，梳毛等行為可能導(dǎo)致意外敲除。

D. 加熱不會導(dǎo)致Tamoxifen失效，37℃過夜溶解他莫昔芬是沒有問題的。

最后，不同的實驗方案、不同的小鼠品系、不同的組織器官等對于給藥劑量、給藥頻率和給藥方式等的要求往往是不同的，因此，上述方法只是一個參考，面對具體實驗時，同學(xué)們還應(yīng)根據(jù)參考文獻、實驗經(jīng)驗先進行預(yù)實驗，以確定最佳方案。

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