質粒電泳3條帶？5條帶？一文告訴你原因

1.相信很多小伙伴將質粒電泳后發現，質粒不是單一條帶，而是出現了很多條帶，例如下圖：

2.質粒為什么出現這樣的情況？

一般理解來說，質粒DNA應如圖2（左）所示的簡單環狀結構。然而，雙鏈環狀DNA的分子軸變形或雙螺旋的扭曲，導致閉合環狀DNA中每個螺旋轉彎的實際堿基對數量發生變化，或者導致螺旋軸發生規則的空間變形，產生拓撲結構，形成質粒DNA的超螺旋性狀（圖2右）。

因此，不同的拓撲結構將使質粒DNA形成多種形式，包括共價封閉圓形（CCC）形式、開放圓形（OC）形式（也稱為“缺口形式"）和線性形式（通常通過奇特的限制性消化獲得）。在CCC形式中，兩條DNA鏈是共價閉合的，DNA是超螺旋的。這種亞型的結構最緊密。如果DNA斷裂產生缺口，就會產生OC，卷曲也就消失了。當兩條線在同一位置斷裂時，就會產生線性形式。此外，質粒可能以寡聚體形式出現，例如串聯體，而串聯體又可能以不同的異構體形式存在。所有這些形式都可以通過瓊脂糖凝膠電泳觀察到。但出現多少種條帶會根據你的質粒提取技術、質粒的新鮮程度、電泳液的配置以及瓊脂糖凝膠的配置等有所不同。

2.怎么區分質粒的電泳條帶？

一般來說，質粒遷移速度由快到慢分別是共價封閉原形（超螺旋）形式、線性和開放圓環（開環）形式，并伴隨著其他形式。原因是：電泳DNA遷移速率與分子大小和構象相關，分子構象越大，空間位阻阻力越大。超螺旋結構較為緊密，因此跑的快；開環質粒由于DNA斷開，阻力增大，因此跑的最慢。

3.怎么驗證質粒是否可用？

綜上所述，質粒存在多少條帶與多種因素相關，沒有存在絕對的衡量標準。但如果用限制性內切酶消化質粒DNA，只會出現一條清晰的條帶。并且，由于酶切形成線性化DNA片段，其電泳遷移速率會比對照組原始質粒的超螺旋結構速度慢，可以檢驗質粒是否被切開。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務。