裸鼠皮下成瘤實驗

裸鼠皮下成瘤實驗用于研究腫瘤的形成、發展以及針對腫瘤的治療方法。裸鼠是一種缺乏免疫系統的小鼠品種，因此能夠更容易地接受移植的異種組織，比如人類腫瘤細胞。在這種實驗中，通常會將人類腫瘤細胞注射到裸鼠的皮下組織中，形成腫瘤。然后觀察腫瘤的生長情況、病理學特征以及對治療方法的反應。

此實驗通常用于評估潛在的抗腫瘤藥物、免疫治療方法或其他治療策略的有效性。通過在裸鼠模型中進行實驗，可以更好地理解腫瘤的生物學特性，并為臨床治療提供重要的參考依據。

實驗步驟

1.準備工作：準備對數期生長的、細胞密度達80-90%左右的腫瘤細胞。

2.細胞收集：棄掉舊培養基，用PBS清洗細胞1-2次（去除細胞中的血清），使用胰酶消化細胞，制備成細胞懸液，離心，去上清，接著用PBS或者無血清培養基重懸細胞并進行細胞計數，計算所需的終濃度。通常皮下瘤接種時，使用的細胞量為每支1-5×106個細胞，接種體積為0.1毫升，因此細胞懸液的濃度約為1-5×107個細胞/ml。

3.裸鼠接種：用左手固定裸鼠后，在其左側腋窩處進行皮下注射。注射時，將針頭深入皮下約1厘米，注射體積為100微升在接種過程中，應將細胞懸液放置在冰上，以減緩細胞凋亡。

4.接種后處理：接種完成后將裸鼠放回其籠中繼續進行飼養，大約1周后可以觀察到腫瘤的形成。根據實驗設計，在腫瘤體積未超過1000mm3之前，需要對裸鼠進行無痛苦死亡，并取出腫瘤進行后續處理，如取瘤子拍照或活體成像。

如圖為裸鼠成瘤實驗結果示例（對照組與處理組）：

注意事項

1.細胞在指數生長階段收集非常重要，因為細胞狀態對細胞系移植后的活力有著極大的影響。如果發現細胞系在異種移植形成的腫瘤活力較差，可以考慮使用Matrigel作為注射混合物，為植入提供豐富的基質環境。

2、在接種時，針頭應深入皮下約1厘米，以減少注射后細胞懸液從針眼溢出的可能性。注射時，針頭應向前方穿行，且在注射前輕微移動針頭，以確保針頭處于皮下。如果針頭能夠移動，則表明它在皮下位置，否則可能在皮內或肌肉內。

3、注射前，一定要排去針管內的空氣。

4、每天監測裸鼠的存活和腫瘤生長是非常重要的，通常需要測量腫瘤的最大（L）和最小（W）長度。一般來說，大約一周左右就可以觀察到米粒大小的腫瘤。

5、細胞消化后應立即移植到裸鼠皮下，最好在30分鐘內完成。在過程中，將細胞懸液置于冰上以減緩細胞代謝。

6、在接種前，使用槍將細胞懸液充分吹散，以確保細胞均勻分散，防止細胞聚集并降低其存活率。

7、要注意倫理問題，為避免腫瘤過度生長，一般不建議超過1000mm³。

8、取下瘤子后，將一部分凍存于液氮中，以備將來提取蛋白質和RNA使用；另一部分則用福爾馬林固定，用于免疫組化，免疫熒光等實驗。

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