Lipofectamine ™ RNAiMAX轉染

轉染是實驗過程中常用的技術操作，通俗來說，常見的轉染即為把某種功能性質粒轉到細胞中去，通過轉染試劑的作用在經過一段時間后，收集細胞通過WB、qpcr等來檢測質粒是否正常發揮作用來達到我們實驗的某種需求；不同的質粒通常有不同的轉染試劑和不同的方法，如PEI轉染、lipo2000轉染等。

Lipofectmine ™ RNAiMAX轉染主要供siRNA和Stealth ™ RNAi 雙鏈體轉染使用，具有轉染效率高、對細胞毒性小等優點，分為正向轉染及反向轉染兩種方式。siRNA轉染比較常見，因此本文分享主要針對siRNA反向轉染。

轉染前準備

1.準備試劑包括：Opti-MEM培養基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA、不加雙抗的10%FBS培養基、胰酶、PBS緩沖液等常見處理細胞的試劑。

2.反向轉染要求細胞密度≥90%。

轉染中

1.按正常處理細胞的流程將長滿的細胞經過胰酶消化離心后去上清，注意此處需要加無雙抗的10%FBS培養基1ml進行細胞重懸，重懸完后根據細胞生長速度鋪細胞，保證轉染完后24h細胞密度達到30-50%。

2.轉染復合物制備：根據說明書制備轉染復合物，添加量如下表所示。

根據轉染的實際情況將Opti-MEM培養基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA依次加入到一個無菌Ep管中，按照先加Opti-MEM培養基、再加siRNA最后加Lipofectamine™ RNAiMAX試劑的順序，輕輕混勻室溫孵育20min。

3.20min后依次將轉染復合物加入細胞培養皿種，輕輕混勻，放入細胞培養箱內。

轉染后

1.轉染后24h內最好不要挪動細胞，也不要拿出在顯微鏡下觀察，期間也無需進行細胞換液。

2.轉染后48h后，可拿出細胞觀察細胞形態有無變圓，肉眼觀察轉染效率，對于生長較慢的細胞，其表型可能會在72h內逐漸顯現。根據細胞生長情況可進行換液，注意此時需要換含雙抗的血清培養基。

3.在顯微鏡下觀察細胞形態，若細胞變圓較為厲害，應在轉染后4天左右收細胞進行轉染效率測定，時間太久細胞太少的話檢測難度較大。

4.此種轉染方式最長可維持5-7天的基因敲除效果。

注意事項

1. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑在冰箱4℃保存，切記不能冷凍。

2. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑不宜在室溫放置過久，因此在制備轉染復合物前從冰箱拿出，加完后應立即放回4℃再進行后續操作。

3.轉染復合物制備完成后室溫孵育時間不得超過20min，因此建議將細胞鋪好板后十字混勻，暫放于細胞培養箱內，再進行轉染復合物的制備。

4.siRNA應于-80℃保存。

5.在處理細胞重懸時一定要使用無雙抗的10%FBS培養基，避免細胞死亡，如果在鋪板后還要進行細胞傳代也沒有影響，直接用上述混懸液傳代即可。

6. Lipofectamine ™ RNAiMAX轉染的兩種方式差別不是很大，主要區別在于正向轉染需要提前一天進行細胞鋪板，第二天直接加入轉染復合物，同時還需要在轉染后4-6h進行細胞換液。反向轉染速度比正向轉染更快，操作較為簡潔，因此更建議使用反向轉染。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務。