細胞長不好的原因與解答！

細胞長不好的原因與解答：

培養(yǎng)細胞不貼壁：

可能原因：

1.胰蛋白酶消化過度；

2.支原體污染；

3.培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；

4.細胞老化；

5.接種細胞起始濃度太低或太高。

解決方法

1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；

2.分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

3.使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；、

4.啟用新的保種細胞；

5.調(diào)節(jié)最佳接種細胞濃度。

懸浮細胞成簇

可能原因：

1.培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；

2.支原體污染；

3.蛋白酶過度消化使得細胞裂解；

4.DNA污染。

解決方法：

1.用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸

2.細胞獲得單細胞懸液；

3.分離培養(yǎng)物，檢測支原體；

4.DNasel處理細胞。

培養(yǎng)細胞生長緩慢

可能原因：

1.由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

2.培養(yǎng)液中一些細胞生長必須成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；

3.培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；

4.試劑保存不當；

5.接種細胞起始濃度太低；

6.細胞已老化；

7.支原體污染。

解決方法：

1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；

2.換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；

3.用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

4.血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

5.增加接種細胞起始濃度；

6.換用新的保種細胞；

7.分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

培養(yǎng)細胞生長不好：

可能原因：

細胞本身的狀態(tài)

1. 細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；

2. 細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；

3. 細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；

4. 胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未全部分離而成團，細胞死亡；

5. 細胞的凍存與復蘇：慢凍速溶。

污染

1. 支原體污染；

2. 霉菌污染。

培養(yǎng)基或血清

1. 更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；

2. 選擇的培養(yǎng)基是否合適；

3. 培養(yǎng)基配制是否合適；

4. 培養(yǎng)基配制是否準確無誤。

培養(yǎng)環(huán)境

1. CO2供應是否正常；

2. 培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法

根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案

1.注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)，接種量等；

2.避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)，合法，可朔源的血清）；

3.要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗證；

4.注意實驗室的環(huán)境。

培養(yǎng)細胞死亡：

可能原因：

1.培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；

2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；

3.細胞凍存或復蘇過程中損傷；

4.培養(yǎng)液滲透壓不正確；

5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。

解決方法：
1.檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

3.取新的保存細胞種；

4.檢測培養(yǎng)液滲透壓；

5.換入新鮮培養(yǎng)液；

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線，在各個領域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務。