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      H1人胚胎干細胞培養常見問題

      發布時間: 2023-02-24  點擊次數: 1503次

      疑難解答

      是否還需要往H1細胞專用培養基中補充或添加成分?

      不需要。H1細胞培養基中各個成分的質量和濃度都經過了優化實驗,支持人ESC/iPSC的長期培養,無需再自行添加。

      培養基中有沉淀狀物質是否是質量問題?

      添加劑在解凍過程中,若有少量沉淀析出,屬于正常現象,不影響使用,請充分混勻后與基礎培養基混合。但添加劑不能在37℃解凍,否則會析出大量沉淀,影響培養基的效價。如果培養基中出現大量沉淀,請不要使用。

      •是否能在37 ℃反復水浴H1細胞專用培養基?

      不能。頻繁地在4℃和37℃之間轉換會導致H1細胞專用培養基中含有的因子失活,H1細胞專用培養基在使用前平衡至室溫即可。

      • H1細胞在傳代后不貼壁怎么解決?

      造成H1傳代后不貼壁的最可能的原因:

      ① 細胞消化時間不合適;②消化后吹打次數不合適,使得完成傳代后細胞集落過大或過小。

      • H1分化怎么處理?

      ① 細胞在剛復蘇或傳代時,小的細胞團不呈現標準的克隆形態,培養幾天或傳代后可恢復。②如果H1分化的表現為干細胞克隆形態良好,克隆周邊出現散在的分化細胞,可通過高比例傳代(≥1:10),使得分化細胞的密度減少,低密度的分化細胞可被H1培養體系篩選去除,如未全去除,可用細胞刮或巴斯德管刮除。

      ② 如果H1分化的表現為克隆內部松散,邊緣不平滑,在分化比例小或分化不嚴重的情況下,可通過連續傳代2 ~ 3次恢復,如果分化嚴重,建議棄除。

      • 細胞復蘇率低是什么原因?

      細胞復蘇需使用H1細胞復蘇培養基,可大大提高細胞的復蘇效率。復蘇過程中,轉移細胞、吹打混勻和重懸細胞時,吹打力度要輕柔,并盡量減少吹打次數,細胞接種后,即刻在顯微鏡下觀察細胞團塊的大小,4 ~ 10個細胞的團塊為最佳。如果吹打力度過大或次數過多,導致細胞分散成單細胞,細胞復蘇率將偏低。


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