實驗材料準備：
細胞，可拍照的顯微鏡,Transwell小室,孔徑8μm,沒包被膠的Transwell,遷移實驗的細胞培養板24孔板。細胞培養板應當與購買的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,無血清的基礎培養基，BSA，正常的*培養基,無菌PBS,棉簽,胰酶,4%多聚甲醛固定液或者甲醇,結晶紫染液(0.1%PBS結晶紫)
-
細胞侵襲實驗全步驟解析
發布時間： 2022-06-08 點擊次數： 3674次Transwell操作步驟
01
用BD公司的Matrigel 1:8或者根據細胞產生mmp的量來決定稀釋,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠。使用前進行基底膜水化。
02
制備細胞懸液前可先用基礎培養基加1%的血清培養細胞，讓細胞饑餓12-24h,進一步去除血清的影響。
03
消化細胞,終止消化后離心棄去培養液,(用PBS洗1-2遍),用含0.1%的BSA的無血清培養基重懸及調整密度，通常調整細胞密度至5×10^5cells/ml。
04
取細胞懸液100μl加入Transwell上室, 也可以根據細胞生長速度進行調整，操作小提示：接種劑量不同的細胞，其侵襲能力是不同的，細胞量過多，穿過膜的細胞會過多過快，最后會難以統計結果;而細胞量過少，可能還沒到檢測的時間點，所有的細胞都已穿過，進入下室。因此最少也要保證在收樣的時候，上室內還要有一定量的細胞存在。
05
24孔板下室一般加入600μl含生長因子或血清的*培養基,特別注意的是,下層培養液和小室間常會有氣泡產生,一旦產生氣泡,下層培養液的趨化作用就會減弱甚至消失,種板時一旦出現氣泡,要將小室提起去除完氣泡,再將小室放進培養板。若是平行孔，一般設置兩組.
06
培養細胞:常規培養12-48h(主要依細胞侵襲能力而定)。24h較常見,時間節點的設置除了要考慮到細胞的侵襲力外,處理因素以及細胞數目的影響也不可忽視。
統計結果步驟：
01
采用直接計數法,取出Transwell小室,棄去孔中培養液,用無鈣的PBS洗2遍,甲醇固定30分鐘,將小室適當風干。
02
0.1%結晶紫染色20 min,用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞,注意不要蹭到已穿膜的那一層細胞，之后再用PBS洗3遍。
03
400倍顯微鏡下每個樣本取6-10個視野觀察細胞計數，取平均值，統計分析。
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業
- 下一篇：夏天到了，您做好預防細胞污染了嗎？
- 上一篇：科研小白入門必修之MTT實驗操作總結
