銷售熱線

    19126518388
    • 技術(shù)文章ARTICLE

      您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 巨噬細(xì)胞應(yīng)該如何培養(yǎng)呢?

      巨噬細(xì)胞應(yīng)該如何培養(yǎng)呢?

      發(fā)布時(shí)間: 2022-04-13  點(diǎn)擊次數(shù): 4326次

      一篇文章幫您解決培養(yǎng)巨噬細(xì)胞所有的煩惱~


      細(xì)胞 · 介紹

      ?   單核細(xì)胞及由單核細(xì)胞演變而來的具有吞噬功能的巨噬細(xì)胞,稱為單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)。單核細(xì)胞發(fā)生于骨髓的多能干細(xì)胞,循環(huán)于血液中,穿透血管內(nèi)皮進(jìn)入組織內(nèi),轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞。單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)在體內(nèi)分布廣,細(xì)胞數(shù)量多,主要分布于疏松結(jié)締組織、肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓、腦、肺以及腹膜等處,并依其所在組織的不同而有不同的名稱。


        單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞有很強(qiáng)的吞噬能力,能吞噬異物、細(xì)菌、衰老和突變的細(xì)胞等。此外,也吞噬抗原抗體復(fù)合物,并參與脂質(zhì)與膽固醇代謝,可吞噬和蓄積脂質(zhì)。吞噬的生理意義在于消除體內(nèi)不需要的物質(zhì),其中巨噬細(xì)胞與淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞,在功能上,有互相促進(jìn)和互相抑制的作用。當(dāng)單核吞噬細(xì)胞系的生理功能失調(diào)時(shí),可引起多種疾病。


      ?   因此,巨噬細(xì)胞常被用來做相關(guān)研究。RAW 264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤;在正常培養(yǎng)中,細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)多邊形和不規(guī)則形狀,并伴有許多偽足的生成,細(xì)胞貼壁能力強(qiáng)。RAW 264.7細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。


      名 稱RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
      形 態(tài)不規(guī)則形
      生長(zhǎng)特性貼壁;細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,2-3天即可傳一代
      營(yíng)養(yǎng)體系DMEM+ 10%FBS


      圖片

      RAW 264.7

      小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞




      ???

      正常細(xì)胞形態(tài):

      剛接種半小時(shí)左右剛貼壁時(shí)細(xì)胞呈圓形,折光度很好,鏡下觀察如小珍珠狀一個(gè)個(gè)地散落于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)一段時(shí)間后一小片一小片的生長(zhǎng),片片不相連。



      ???

      異常細(xì)胞形態(tài):

      圖片


      特點(diǎn):

      RAW264.7細(xì)胞極其容易出現(xiàn)偽足(長(zhǎng)角)。需要及時(shí)觀察細(xì)胞,若出現(xiàn)偽足則提示該傳代了(可能是一天一傳)。


      當(dāng)出現(xiàn)少量的偽足可正常傳代,有少數(shù)分化的細(xì)胞是正常的,很難保證可以*不分化。


      分化的細(xì)胞:呈多角形,明顯的體積變大,時(shí)常有較長(zhǎng)的觸角。



      ???

      培養(yǎng)的煩惱與解決:

      1?

      胰酶消化刺激RAW 264.7細(xì)胞嚴(yán)重分化

      圖片

      分化的RAW 264.7細(xì)胞


      被胰酶消化過的RAW 264.7細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的分化現(xiàn)象呈多角形,有較長(zhǎng)觸角。


      解決辦法:刮取是比較合適的方法。把細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉,加入37℃預(yù)溫的PBS,然后刮細(xì)胞,食指和拇指夾緊細(xì)胞刮,細(xì)胞刮橡膠頭刮面切面與平皿平行,用腕力輕輕刮(注意用腕力刮,不要用臂力),切記只能刮一次,不要來回刮和反復(fù)刮,吹打的力度一定要輕,切勿暴力吹打。



      2?

      血清批間差刺激RAW 264.7細(xì)胞嚴(yán)重聚團(tuán)

      圖片

      更換血清批次后嚴(yán)重聚團(tuán)的RAW 264.7


      原因推斷:血清來源于動(dòng)物,其組成成分有1000種左右,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件而異。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的,所以批間差異是存在的。RAW 264.7細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性,但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激。

      解決辦法:先用血清試用裝,試用效果好,可購(gòu)買和血清試用裝批次相同的正裝,囤積半年或一年的用量,有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響(胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年)。



      3?

      有分化的細(xì)胞說明細(xì)胞狀態(tài)不好嗎?

      圖片

      個(gè)別分化的RAW 264.7細(xì)胞


      培養(yǎng)時(shí),無法保證100% 不分化,通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,2-3天即可傳一代, 傳代時(shí)間間隔超過3天很難吹下,每一次接種密度都要控制好。


      解決辦法:推薦傳代比例為1:3-1:6;推薦傳代時(shí)間:2-3天;推薦傳代融合率:80%-90%。



      ???

      以下為培養(yǎng)不錯(cuò)的RAW 264.7細(xì)胞形態(tài)

      圖片
      圖片

      RAW 264.7細(xì)胞


      生長(zhǎng)良好的RAW264.7 胞體邊界感清晰,各個(gè)喂得圓鼓鼓、胖嘟嘟的,時(shí)刻準(zhǔn)備著為人類生命科學(xué)研究而“獻(xiàn)身"。




      ???

      聽說熱滅活的血清適合培養(yǎng)巨噬細(xì)胞?

      最后為大家普及一條知識(shí)~


      熱滅活可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中,培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。


      熱滅活時(shí)請(qǐng)將血清置于 56℃水浴30分鐘。最好另加一個(gè)盛放與血清等體積水的燒杯并將溫度計(jì)插入水中,以水中溫度56℃為計(jì)時(shí)開始時(shí)間,加熱過程中不時(shí)輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清。


      實(shí)驗(yàn)顯示,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言,不需要使用熱滅活血清。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或*沒有作用,造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。同時(shí)沉淀物會(huì)顯著地增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察呈小黑點(diǎn)或絮狀物,影響細(xì)胞觀察。若非必須,不需要做熱滅活處理。



      以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊

       

      安培生物科技有限公司介紹:

      安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


    產(chǎn)品中心 Products
    久久久久久国产精品视频| 无码国内精品久久人妻麻豆按摩| 国产69精品久久久久久人妻精品| 天天拍夜夜添久久精品| 99久久国产综合精品1尤物| 久久久无码精品亚洲日韩软件| 国产99久久久国产精品小说 | 久久成人18免费网站| 久久99热这里只频精品6| 午夜人妻久久久久久久久| 亚洲中文久久精品无码| 一本色道久久综合狠狠躁篇| …久久精品99久久香蕉国产| 亚洲AV乱码久久精品蜜桃| 精品久久久久久国产| 亚洲午夜福利精品久久| 国内精品久久久久久久久齐齐| 久久精品亚洲中文字幕无码麻豆| 一本久久A久久免费精品不卡 | 性高湖久久久久久久久AAAAA| 97久久精品无码一区二区天美| 久久久噜噜噜久久中文福利| 久久精品综合电影| 亚洲精品无码久久千人斩| 久久er国产精品免费观看8| 无码国内精品久久人妻麻豆按摩| 国产精品久久久久久亚洲影视| 偷偷做久久久久网站| 久久精品青青草原伊人| 亚洲综合熟女久久久30p| 久久99精品久久久久久噜噜 | 久久精品aⅴ无码中文字字幕重口| 久久久久成人片免费观看蜜芽| 久久精品视频一区| 久久影院最新消息| 久久精品久久精品久久精品| 久久精品国产亚洲香蕉| 久久精品韩国三级| 久久国产精品最新一区| 久久免费公开视频| 人妻精品久久久久中文字幕69|