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      含甲酰胺的測序膠

      發(fā)布時(shí)間: 2021-12-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1393次

      原理

      聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產(chǎn)物的二級結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。

      材料與儀器

      DNA
      甲酰胺 甲醇 乙醇 TEMED SDS
      電泳儀

      步驟

      1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

       
      2.  按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液,加熱輕輕挽拌使之溶解,冷卻至30℃以下。

      3.  加入0.15 ml TEMED及1 ml 10%過硫酸銨,馬上灌膠于凝膠平板夾層,觀察聚合情況。

      4.  在45~70 W 恒功率下電泳。
       
      5.  按基本方案步驟19~33進(jìn)行干膠及處理,但步驟18在5%乙酸 / 20%甲醇固定液中固定凝膠15 min。


      同實(shí)驗(yàn)其他方法

      變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

      1.  制作每塊凝膠時(shí),首先要用肥皂及水小心嚴(yán)格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板,用去離子水沖洗后晾干,用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2.  然后用Kimwi

      電解質(zhì)梯度測序膠

      1.  按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預(yù)電泳,但上槽緩沖液為0.5×TBE,下槽為1×TBE。 2.  按基本方案步驟23~26步準(zhǔn)備樣品及加樣。   3.

      緩沖液梯度測序膠

      1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  在2個(gè)100 ml 燒杯中,配制緩沖液梯度凝膠溶液:50 ml 用0.5×TBE配制,25 ml 用2.5×TBE配制

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