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小鼠皮膚冷凍包埋實(shí)驗(yàn)步驟

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-12　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4983次

簡(jiǎn)介

對(duì)皮膚的冷凍切片進(jìn)行油紅 0 染色可以分析皮脂腺的油脂分泌功能和皮下脂肪層的形態(tài)，常用于小鼠皮膚炎癥及皮脂腺相關(guān)研究。

材料與儀器

器材：液氮、鋁箔、解剖工具、小鼠等
試劑：
① 多聚甲醛（Sigma-Aldrich）
② 冷凍包埋劑

步驟

小鼠皮膚冷凍包埋實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程可分為如下幾步：
A. 對(duì)小鼠處以安樂(lè)后，從背部剪下方形皮膚組織，將該皮膚貼到干凈的濾紙上，用至少 20 倍體積的 4％多聚甲醛固定過(guò)夜（20 小時(shí)，＜ 24 小時(shí)）。注意：把皮膚貼到濾紙上時(shí)，用鑷子輕輕把皮膚展開(kāi)，既不要留下皺褶，也不要太用力拉扯而使組織結(jié)構(gòu)變形。
B. 將固定好的皮膚放入裝有蒸餾水的 50 ml 試管中進(jìn)行清洗，清洗過(guò)程中可以將試管放于脫色搖床上，用較低的速度輕輕搖動(dòng)約 30 分鐘。
C. 將清洗完畢的皮膚放入至少 20 倍皮膚體積的 30％的蔗糖溶液（溶于 PB）中，放置于 4 ℃，直到組織下沉到管底。
D. 將鋁箔疊成小槽子，加入適量冷凍包埋劑。將皮膚組織從蔗糖溶液中取出，先用包埋劑包裹潤(rùn)濕兩遍，以去掉原來(lái)的水相，再把組織放入小槽子，調(diào)整好方向。
E. 馬上小心地把小槽子的底部浸入預(yù)先準(zhǔn)備好的液氮中，注意不要使組織的方向改變。等包埋劑凝固后，把組織塊保存在 -20 ℃ 或 -80 ℃。切片可用于油紅染色或免疫熒光。

注意事項(xiàng)

1. 固定液的選擇應(yīng)該根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求確定。多聚甲醛是很常用的固定液，適合進(jìn)行免疫組化，免疫熒光等方面的實(shí)驗(yàn)；如果只是進(jìn)行形態(tài)的觀察（HE 染色），可以選用 Bouin 固定液；如果要進(jìn)行電鏡分析的小體積樣品，則建議采用戊二醛進(jìn)行固定。
2. 當(dāng)組織在蔗糖溶液中剛沉下時(shí)，即可包埋。
3. 包埋時(shí)要用細(xì)鑷子小心調(diào)整包埋方向，以便今后切片能切到完整的毛囊。

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