如何做核提取物制備優(yōu)化？

步驟

1)按基本方案中步驟1?8操作。

2)在低鹽緩沖液中重懸細(xì)胞核后（1/2體積pnv，見基本方案步驟8)，將細(xì)胞核懸液分成5等份。

3)在冷室內(nèi)不斷攪拌，按如下方法在每份懸液中加入1/3體積高鹽緩沖液：在第1份 中加KCl濃度低至（0.8 mol/L)的高鹽緩沖液，其余各份中依次加入KCl濃度逐 漸增高（直到1. 6 mol/L)的高鹽緩沖液。

4)確定在離心管斜面上有提取出的細(xì)胞核，輕輕混合30 min。

5)25000 g離心30 min,除掉核。

6)將上清輕輕倒出，進(jìn)行透析（見基本方案步驟12)，直到加KCl濃度最高的那份核懸液的電導(dǎo)率達(dá)到與透析液一致（100 mmol/L KCl)。提取物25000 g離心20 min。

7)檢測各份提取物的電導(dǎo)率并測定蛋白質(zhì)濃度（見基本方案步驟13和14)。

8)直接分析提取物或分裝到試管中，在液氮中速冷后放入-80℃保存。