細胞培養無小事，需注意的四個事項！

培養細胞的*培養基一般由基礎培養基（如MEM）和添加劑（血清或細胞生長因子）組成，培養基的配方都會隨著細胞需要的營養不斷的改進 ，而抗生素也是，廣譜抗生素使用太多，會導致細胞的耐受性提高，從而產生抗性，甚至有些老師為了實驗的精確性，選擇不用抗生素培養細胞。

一、基礎培養基

絕大多數培養基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養物質，生物學最是通用的培養基是Dulbecco`s改良培養基——DMEM，同MEM含有相同的營養成分，但濃度高出2~4倍。細胞培養選擇某種培養基，應仔細了解成分表，選擇適合細胞成長的培養基 ，一般來說，懸浮細胞用1640培養基比較多，而貼壁細胞用DMEM的較為常見。

在有些培養基中谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度，這是因為它具有不穩定性以及在許多細胞培養中它常用作碳源。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3，培養敏感的神經細胞時要用10%的CO2來平衡，當然也可以在較低CO2濃度下使用。這些基礎培養基的組成成分是建立在對不同細胞系生長的研究之上的，但通常在原代培養中使用也能有比較令人滿意的結果。

原則上，HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養環境的限制。實際操作中并非如此簡單。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長是重要的。Leiboviz`s L15培養基采用了與眾不同的BSS作基礎，它含有高濃度的氨基酸來提高緩沖能力，培養基中使用半乳糖作碳源，以阻止培養基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產生。所以使用L-15培養基培養的細胞一般都需要密封培養瓶，或者使用100%的空氣培養。

二、血清

細胞在單純的基礎培養基中不能存活，在特殊類型的細胞培養中必須提供某些有營養物質及生長因子才能使細胞得以生長并維持生長狀態。基礎培養基常常要添加血清，血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來源須用經驗確定，廣泛應用的血清種類有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細胞用的血清，也用于細胞系和原代培養。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經元培養。

血清的不同批號含有不同的成分，應該在使用前對血清進行測試。大多數試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，

三、抗生素

在細胞培養中較為常用的抗生素是青霉素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈霉素（25~100μg/ml）。這兩種抗生素常混合使用。在一些實驗室里，它們常規加入所有的培養基中。慶大霉素（10~100μg/ml）通常有廣譜抗菌效應，并具有溶液穩定性，一般實驗室經常使用。

四、培養的保持

培養物是應該保持在孵箱中的。孵箱可以自動將O2與CO2混合很快達到培養基的設計要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多，高濕度可避免培養皿中培養基的蒸發，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應該經常換，乘水容器應經常消毒以防霉菌生長。若孵箱曾被霉菌孢子嚴重污染過，那么要想*去除污染則會非常困難。當培養物必須要長期保持在孵箱中時，應采用較少培養基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發，或采用相應的按比例供空氣的孵箱。

溫度的精確調節應定期檢查，孵箱溫度常設置為37℃或較低溫度。細胞在低溫時可有較長時間的忍耐限度，但當溫度升至39℃時，幾小時內即死亡。